【求助】慢病毒转染肠癌贴壁细胞相关问题(急)
丁香园论坛
2008
请教各位老师们:本人今天上午9:00做慢病毒转染肠癌贴壁细胞(SW620、HCT116),结果今晚6:00去换液观察一下细胞,其中有几个孔细胞死了很多,仅在孔边缘存活几个,有些孔细胞比较多。请老师们帮忙指导。谢谢!具体步骤如下:
慢病毒包装:一、1D接293T细胞于6孔板中,undefined10 6/孔
二、2D采用3质粒系统包装,12小时换液(1640+10%FBS)
三、36小时收病毒,用0.22mm过滤,备用
转染SW620、HCT116细胞
一、1D接种两种细胞,undefined10 5/孔
二、长到40%时加病毒2毫升,聚凝胺1.22ul
三、9小时换液。
慢病毒包装:一、1D接293T细胞于6孔板中,undefined10 6/孔
二、2D采用3质粒系统包装,12小时换液(1640+10%FBS)
三、36小时收病毒,用0.22mm过滤,备用
转染SW620、HCT116细胞
一、1D接种两种细胞,undefined10 5/孔
二、长到40%时加病毒2毫升,聚凝胺1.22ul
三、9小时换液。
感觉上病毒量好像有点大
个人认为你的病毒就不应该使用0.22um的滤膜过滤,细胞死的主要原因可能就是病毒的原因,但是我认为不是病毒滴度高的原因
用0.22mm过滤 ?纯度有问题吧
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