材料与仪器
步骤
1、革兰氏染色标本：大肠杆菌和伤寒杆菌革兰氏染色呈红色、G－杆菌，两端钝圆，中等大小。
2、琼脂平板培养物
（1）伊红美蓝培养基：为常用的肠道致病菌分离鉴别培养基。在该培养基上，大肠杆菌能发酵乳糖产酸，使伊红与美蓝合成紫黑色化合物，故其菌落呈紫黑色，伤寒杆菌对乳糖不分解，故其菌落呈无色或微黄色透明菌落。
（2）S-S培养基：为常用的肠道致病菌选择培养基，内含柠檬酸钠、煌绿对大肠杆菌有抑制作用，胆盐对沙门菌、痢疾杆菌有促生长作用，还含有乳糖和酸碱指示剂中性红。在该培养基上，大肠杆菌能分解乳糖产酸，使菌落呈红色，伤寒杆菌不能分解乳糖，菌落无色透明。
（3）双糖铁斜面：是一种高层斜面培养基，由两层组成。上层是用蛋白胨水加入1%乳糖和硫酸亚铁制成的固体斜面，以酚红为指示剂，可观察细菌对乳糖 发酵结果和硫化氢试验结果。下层为含葡萄糖的蛋白胨水半固体，以酚红为指示剂，可观察细菌的动力和乳糖发酵能力。接种时，先用接种针按半固体培养基接种法 穿刺接种，沿原线退出后再划线接种斜面。置37℃恒温箱经18～24小时培养后观察细菌生长情况（表1）。
2、琼脂平板培养物
（1）伊红美蓝培养基：为常用的肠道致病菌分离鉴别培养基。在该培养基上，大肠杆菌能发酵乳糖产酸，使伊红与美蓝合成紫黑色化合物，故其菌落呈紫黑色，伤寒杆菌对乳糖不分解，故其菌落呈无色或微黄色透明菌落。
（2）S-S培养基：为常用的肠道致病菌选择培养基，内含柠檬酸钠、煌绿对大肠杆菌有抑制作用，胆盐对沙门菌、痢疾杆菌有促生长作用，还含有乳糖和酸碱指示剂中性红。在该培养基上，大肠杆菌能分解乳糖产酸，使菌落呈红色，伤寒杆菌不能分解乳糖，菌落无色透明。
（3）双糖铁斜面：是一种高层斜面培养基，由两层组成。上层是用蛋白胨水加入1%乳糖和硫酸亚铁制成的固体斜面，以酚红为指示剂，可观察细菌对乳糖 发酵结果和硫化氢试验结果。下层为含葡萄糖的蛋白胨水半固体，以酚红为指示剂，可观察细菌的动力和乳糖发酵能力。接种时，先用接种针按半固体培养基接种法 穿刺接种，沿原线退出后再划线接种斜面。置37℃恒温箱经18～24小时培养后观察细菌生长情况（表1）。
表1 大肠杆菌和伤寒杆菌在双糖铁斜面上的生长情况
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<font>菌种</font> |
<font>乳糖</font> |
<font>硫化氢</font> |
<font>葡萄糖</font> |
<font>动力</font> |
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<font>大肠杆菌</font> |
<font>产酸产气</font> |
<font>－</font> |
<font>产酸产气</font> |
<font>＋</font> |
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<font>伤寒杆菌</font> |
<font>－</font> |
<font>＋/－</font> |
<font>产酸产气</font> |
<font>＋</font> |
来源：丁香实验
