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骨组织如何提基因?我在提骨结核的结核杆菌,如何提取骨细胞基因?

相关实验:大分子物质的水解实验

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dxy_jzjvpfs7

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3 个回答

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balalaLy

有帮助

跟其它组织类似,用液氮研磨然后加trizol裂解

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Eason老歌迷

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骨钳夹碎骨组织后放入研钵(研钵在180度干烤2小时),加入液氮后反复研磨成细粉,注意液氮蒸发后不断补加保存液氮一直存在。 转移100mg细粉加至预热的裂解液CLB离心管中。立即剧烈涡旋30-60秒或者用吸头吹打混匀裂解直得到满意匀浆结果(或者电动匀浆30秒),可以剪切DNA,降低粘稠度和提高产量。短时放回 65°C水浴中(10 min),中间偶尔颠倒1-2次帮助裂解。将裂解物4°C 13,000 rpm离心10分钟,沉淀不能裂解的碎片。取裂解物上清转到一个新离心管。加入上清体积一半的无水乙醇(0.5体积),此时可能出现沉淀,但是不影响提取过程,立即吹打混匀,不要离心。若上清表面有漂浮物,用吸头挑开吸取下面液体即可。将混合物(每次小于720μl,多可以分两次加入)加入一个基因组清除柱中,(清除柱放入收集管中)13,000 rpm离心2分钟,弃掉废液。确保离心后液体全部滤过去,膜上没有残留,如有必要,可以加大离心力和离心时间。将基因组DNA清除柱子放在一个干净2ml离心管内(不用RNAse free 或者DEPC处理,一般干净的新离心管即可。也可使用RNA吸附柱配套的新的干净收集管),在基因组清除柱内加500μl裂解液RLT Plus,13,000 rpm离心30秒, 收集滤液(RNA在滤液中),用微量移液器较精确估计滤过液体积(通常为450-500μl左右,滤过时候损失体积应该减去),加入0.5倍体积的无水乙醇,此时可能出现沉淀,但是不影响提取过程,立即吹打混匀,不要离心。立刻将混合物(每次小于720μl,多可以分两次加入)加入一个吸附柱RA中,(吸附柱放入收集管中)13,000 rpm离心2分钟,弃掉废液。加700μl 去蛋白液RW1,室温放置1分钟,13,000rpm 离心30秒,弃掉废液。加入500μl漂洗液RW(请先检查是否已加入无水乙醇!),13,000 rpm 离心30秒,弃掉废液。加入500μl漂洗液RW,重复一遍。将吸附柱RA放回空收集管中,13,000 rpm离心2分钟,尽量除去漂洗液, 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。取出吸附柱RA,放入一个RNase free离心管中,根据预期RNA产量在吸附膜的中间部位加30-50μl RNase free water(事先在 70-90℃水浴中加热可提高产量), 室温放置1分钟,12,000 rpm 离心1分钟。

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丁香清香

有帮助

可以用专用的试剂盒提取,比如说,有专用的小鼠骨骼RNA提取试剂盒。

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