科研小白77
我每次敲除质粒电转后,涂K25板会糊一层然后上面再长几个单菌落,糊板的菌再K50的板上扩培长不起来,上一层的单菌落会长,这种是什么原因呢
毛利小五郎的徒弟
K25的有效成分太高了,浓度低一点会好一些。
loveliufudan
可能有几个原因导致您在涂K25板后出现了糊板的现象,并且在扩培到K50板时有单菌落长大而其他菌种长不大的现象:
涂板的技术不够好,可能涂板时涂层太厚或不均匀,导致部分细菌聚集在一起形成糊状。
电敲过程中可能存在细胞破裂等不完全的情况,导致质粒或染色体DNA外泄,也可能导致一些不明显的细菌聚集。
您使用的是K25选择板,这种选择板通常含有抗生素(如卡那霉素),并且抗生素浓度较高,可能会影响细胞生长和扩散,导致糊板的现象。
您在涂K50板时可能将糊状菌液也涂在了上面,导致其他菌种无法生长而只有单菌落生长。
为了解决这些问题,您可以尝试使用更细致的涂板技术来避免糊板的产生。在电敲过程中尽量避免细胞破裂,可以通过缩短电敲时间、降低电场强度等方式来尽量保护细胞完整性。如果使用K25选择板导致糊板现象,可以尝试使用K50选择板来代替。在涂板时,应该尽量避免将糊状菌液涂在上面,可以通过调整涂板时的液体量、涂层厚度等方式来避免这种情况的发生。