烫N5RS
FITC和DAPI的发射光重叠如图所示,但听说这两个荧光素实际上没有多大补偿,有大佬做过吗(贝克曼的流式仪)?除此之外,我的DAPI单染管做出来是这个样子的,这算没有补偿吗?但是我的空白管DAPI阴性在10^3左边,为什么单染管变成了10^3右边?求大佬帮忙解答
loveliufudan
FITC和DAP是两种常用的荧光素,它们的发射光重叠是不能避免的。在流式细胞仪上,使用这两种荧光素的同时需要使用补偿技术来减小发射光重叠的影响,以获得较高的实验精度。
听说这两个荧光素实际上没有多大补偿,是不准确的。在流式细胞仪上,使用FITC和DAP进行双染时,需要进行补偿来减小发射光重叠,通常使用空白管或其他方法进行补偿。
图里的DAP单染管样子可能是由于染色过程中发生的误差或其他原因导致的。如果DAP1阴性在10^3左边,而单染管变成了10^3右边,可能是由于样本的质量或染色条件不同导致的。建议检查样品的质量,并重新检查染色条件是否正确。
烫N5RS
样本是一致的,并且空白管无需染色,应该不存在染色不一致问题。除此之外,如果在DAPI单染管下看FITC,所有细胞均为FITC阴性,是不是也能证明没有补偿?