佛系养生a
有个问题想求教大家,就是我做一个慢病毒稳转细胞系,EGFP连着P2A,再连着我的目标基因,我的目的是想做稳转细胞系打质谱,看一下与我目的蛋白相互作用的蛋白有哪些,那么我加了一个EGFP荧光蛋白会对我的结果产生很大影响吗
sswei
EGFP连着P2A,再连着目标基因,从而对结果产生干扰
上山打老虎11111
对质谱结果和读取结果没有非常大的影响,但是质谱会得到很多相关蛋白,需鉴别和鉴定
土井挞克树
加了一个EGFP荧光蛋白会对结果产生影响的
loveliufudan
在您的实验中,EGFP荧光蛋白和您的目标基因是通过P2A连接在一起的。因此,EGFP的存在可能会对您的结果产生一些影响。
首先,EGFP的荧光信号可能会干扰您在质谱分析中检测到目标蛋白的信号。质谱分析通常使用光学检测器来检测蛋白的信号,而EGFP的荧光信号可能会在同样的波长范围内发出光信号,从而干扰您的信号检测。
其次,EGFP荧光蛋白可能会与其他蛋白质发生非特异性相互作用,从而干扰您对目标蛋白与其他蛋白的特异性相互作用的检测。这种非特异性相互作用可能会导致您检测到一些虚假阳性信号,从而使您的结果变得不可靠。
因此,在进行质谱分析之前,您需要考虑到EGFP的存在可能会对您的实验产生一定的影响。您可以采用一些方法来减少这种影响,例如使用荧光标记的对照来校正信号、使用其他标记技术来代替EGFP等。最好的方法是在实验之前进行一些前期的测试和控制实验,以确定EGFP对您的实验的影响,并采取相应的措施来减少这种影响。