刚刚接触这个，体外转录时，为什么需要还需要反向DNA oligo,将其退火后为双链转录模板，转录什么

反转录时，反向DNA oligo和样品中的RNA互补序列结合，延伸时是一段一段延伸的，需要一段一段连接起来，效率低，延伸以后会形成另一条互补DNA链，即形成了DNA双链模板，它需要退火使其解链才能进行后续PCR扩增

在体外转录实验中，反向DNA oligo的主要作用是用作DNA模板。由于反向DNA oligo是单链的，因此需要通过退火的方式将其转变为双链DNA模板。这样可以在转录反应中提供一个可靠的DNA模板，以便RNA聚合酶与其结合，从而合成RNA分子。反向DNA oligo可以编码各种类型的RNA，例如mRNA，siRNA，miRNA等。在转录反应中，RNA聚合酶会根据DNA模板序列合成RNA分子，这些RNA分子可以用于各种下游应用，如原位杂交、Northern blotting和RNA测序等。

反向DNAoligo可以对有互补重叠区的Oligo进行延伸连接获得小DNA片段，然后小DNA片段以重叠PCR的方式进行逐步连接获得目的DNA片段，以其作为模板，进一步PCR扩增可以大量获得目的片段