配体外转录体系时模板加入时机

在配体外转录体系中，模板DNA通常需要在反应缓冲液中进行反应。如果模板DNA在反应缓冲液之前加入，会对转录反应的结果产生一些不利的影响，如：

形成DNA结构：模板DNA在缓冲液中可以被完全溶解，并处于单链线性的状态，这是进行转录反应的必要条件。如果模板DNA在缓冲液之前加入，可能会形成复杂的结构，如二级结构或聚集体，从而阻碍RNA聚合酶的结合和转录反应的进行。

降低转录效率：如果模板DNA在反应缓冲液之前加入，可能会导致RNA聚合酶在反应中被过度稀释，从而降低反应的效率和产量。

因此，为了确保转录反应的有效进行，通常建议将模板DNA加入到配体外转录反应中的反应缓冲液中。当然，具体的实验操作仍需根据不同的实验设计和反应条件来确定。

在之前加会转录失败，不利于转录进行。

在配体外转录体系时模板最好是在 reaction buffer之后加。