毕赤酵母表达跨膜蛋白

可能的原因有：

1、上样时没有目的蛋白，可能是1)没表达2)亲和层析时没洗脱或是穿透了;

2、目的蛋白结合在FPLC柱子上没被洗脱;

3、目的蛋白穿透FPLC柱子，在FPLC上看到的大峰可能是盐分峰;

4、电泳时没跑好,目的蛋白没被检测到。

5、要看吸收值，如果吸收值不高的话就是蛋白的浓度太低,浓缩后再跑电泳。

样品中可能含有蛋白酶，使蛋白样品分解成小分子。目标蛋白浓度过低（低于检测下线）。转膜时间太短导致目标蛋白没有充分转移到膜上，或者转膜时间过长导致样品转穿。一抗的特异性不佳，导致一抗无法识别目标蛋白。一抗反复使用后导致效价降低，尽管还能与目标蛋白连接，但连接蛋白的数量太少。洗脱过渡导致与一抗相结合的目标蛋白被洗掉。

考虑体系内存在蛋白降解，所以没有条带显示

表达条件和表达时间可能是影响表达的因素之一。有些蛋白需要更长时间才能表达出来，建议您将培养时间延长至更长时间（例如24小时或更久）并再次尝试 WB 和考蓝染色。同时，您可以考虑增加表达条件（如温度、培养基、诱导剂浓度等）来提高表达水平。此外，还应检查您的质粒是否正确、酵母是否正常生长以及蛋白质是否被顺利转录、翻译和折叠。如果以上因素都不是问题，那么您可能需要重新设计和构建表达载体或更换宿主菌株。