流式测凋亡上机测试前的清洗，注意点是什么

用PBS洗2次，1000r/min离心5min，收集沉淀。休息要尽量弃净上清，可以用枪头吸出去，然后用4℃预冷的70%的冰乙醇1ml重悬，4℃过夜。

流式样品的准备：DNA含量的测定：用本法可以测定细胞周期、细胞倍体和凋亡，在样品的制备中存在的问题主要是细胞的聚集和碎片，建议在固定细胞时加入3％小牛血清。1 培养或分离的细胞约110 6，离心沉淀后用0.3ml含10％小牛血清的PBS悬浮，移入1.5mlEP管中，加入0.7ml无水乙醇，置－20摄氏度下固定细胞24小时以上（用本法制定的细胞可以在－20摄氏度下保存一周甚至更长的时间）。2 3000rpm离心细胞30妙，吸弃上清，用1mlPBS重悬细胞，再离心洗涤细胞一次，吸弃上清，沉淀细胞用100ul 1mg/ml RNase A悬浮，37摄氏度30min，再加入400ul 50ug/ml PI，置暗处10min后上机检测。3 结果分析：流式报告中可给出G0/G1、S、G2/M各期细胞的百分比，凋亡百分比和细胞倍体

细胞沉淀用4℃预冷的70%的冰乙醇1ml重悬，4℃过夜。每个细胞样品细胞量需达到106（细胞沉淀要打散，避免细胞聚集），细胞量少可能测不出结果，或结果不太准确。