如何有效提升特异性荧光染色的方法？
丁香实验
在间接标记流式抗体实验中，例如：标记二抗是 goat anti-mouse IgG-APC,那么选择用 goat serum 去封闭以减少非特异性荧光染色，这样是否是一个有效提升特异性荧光染色的方法呢？请问还有什么实验设计能够提升实验的特异性呢？
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15 个回答
lyang556
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用石蜡包埋，然后切片尽量切薄（3μm），可使细胞轮廓清晰。用0.1%硼氢化钠室温处理20分钟，然后0.5%苏丹黑室温处理3分钟，以降低自发荧光。
西柚味的芋圆
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一方面，在提取细胞的过程中，在提取液中加入1%-5%的FBS或者BSA， 但是一定要注意，某些Dye细胞染料是氨基染料，FBS会干扰 使细胞维持在含有血清的环境中会让细胞活性更好，结果更好看 同时，在染色之前，再用Fc抗体去封闭细胞15分钟，之后再染色，会大大降低非特异性染色。
peaceful13
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是的～添加goat血清可以一定程度上封闭Fc受体，提高检测特异性～另外可以优化实验方案～抗体滴定啊～还有死细胞的排除等
zgx3876
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一般来说就是做封闭，就是用相应种属的FcR抗体去进行处理
dxy_0mxazdaw
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一方面，在提取细胞的过程中，在提取液中加入1%-5%的FBS或者BSA，使细胞维持在含有血清的环境中。染色之前，再用CD16/32抗体去封闭细胞15分钟，之后再染色，会大大降低非特异性染色。
parallelgmf
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降低非特异性可以使用同型对照，如果是间标需要通过二抗进行，使用一抗的同型对照。另外如果细胞是属于高表达FcR的样本，建议提前进行FcR封闭，可以用血清进行封闭，更建议直接购买商业化的FcR封闭剂。
小破孩YG6Z
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选择血清封闭是一种好的方法，而且可以更换封闭液看效果；此外可以多阅读文献，参考别人选用的抗体品牌，比较选择效果较好的抗体
咸水鱼rain
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建议可以做一个对照，只标记流式的二抗，这样排除二抗的非特异结合
CXCR3
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可以在标抗体前先用anti mouse CD16/32封闭细胞。
AnnaGQTP
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1.封闭 2.抗体用量的滴定 3.FMO对照
颜渊溪桥
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用与二抗同种属的血清可以提高染色特异性，同时实验中对照需要完整，最好需要加一抗同种属Ig-G和二抗来做特异性对照。
dxy_b4qu25j6
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尽量选择与检测组织没有交叉反应的二抗，并且在染色以后进行充分洗涤
dxy_4y8zumb0
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羊血清中不存在这个抗体是可以的。选择合适二抗浓度和孵育时间，可以增加洗板的时间，购买高质量的二抗，增加对照组。
txs900416
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这是一个减少非特异性结合的选择。多设置几个不同的对照组，例如isotype，单独二抗等组也可减少假阳性的出现。
二狗Echo
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添加封闭步骤，有商业化的FcR抗体，使用时对应种属即可。例如BioLegend的TruStain FcX™ PLUS。
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