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吱吱吱1231abc
你好 请问你找到原因了吗 我的也是一直连不上 求指教
小芙fu
.取50μ L 大肠杆菌感受态细胞，加入适量质粒（体积不得超过4μ L ）冰浴30 min 后，42℃热激90s，马上放回冰上，冰浴2 min ；加400μ L LB 培养基，于37℃摇床慢摇振荡培养45-60 min ；取50-100μ L 涂在含有氨苄青霉素（100μ g / mL ）的 LB 固体培养基上，37℃倒置培养过夜。
loveliufudan
以下是一般的PMG36e质粒使用方法的概述，包括转化和链接其他片段：
1. 质粒制备：首先，需要从PMG36e质粒源中提取质粒DNA。这可以通过常规的质粒提取方法（例如迅速碱裂解法或商用质粒提取试剂盒）来完成。
2. 质粒验证：在使用PMG36e质粒之前，确保进行质粒验证。这包括验证质粒的大小、线性性以及所需的限制酶切位点等。这样可以确保你使用的质粒是正确的，并且符合实验要求。
3. 转化细菌：使用合适的转化方法将PMG36e质粒导入目标细菌中。常见的转化方法包括化学转化、电转化和热激转化等。确保选择适合你实验目的和细菌菌株的转化方法，并根据相关文献或经验确定转化的条件。
4. 质粒链接：如果你需要将其他片段链接到PMG36e质粒上，可以使用限制酶消化和连接方法。通过选择适当的限制酶，将目标片段与PMG36e质粒酶切，并使用DNA连接酶将两者连接在一起。确保在连接过程中遵循正确的温度、时间和酶的浓度等条件。
5. 实验出错和细菌生长：如果你的实验经常出错或细菌生长缓慢，可能有几个原因。可能是转化效率低，你可以尝试优化转化条件，例如优化电转化参数或尝试不同的化学转化方法。另外，质粒链接问题可能是由于酶切和连接条件不正确导致的。仔细检查酶切位点和连接方法，确保操作正确。
sswei
1.质粒先5000rpm离心1min，以使壁上的质粒聚集管底；
2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态，置于冰上解冻，并做好标记；
3、取2μl质粒加至100μl感受态中，冰浴30min；
4、42℃热激90s，再冰浴5min；
5、加入900μl无抗的LB液体培养基，220rpm震荡培养1h；
6、6000rpm离心5min，仅留100ul上清,并混匀菌体沉淀；
7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上，用涂棒涂匀；
8、将平板正向培养1h，再倒置培养培养12-16h；
9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中，震荡培养12-16h，根据实验需要提取质粒。
注意事项：
1.转化前请准确查找该质粒相应的抗生素名称、抗生素使用浓度、感受态名称和培养温度。
2.如果是甘油菌种，请先四区划线，挑取单克隆培养。
3.如果第二天转化平板长的过多，将质粒按比例稀释后再转化。
