dxy_h900o0br
我想问一下大家,在做RNA的非变性琼脂糖凝胶电泳测RNA完整性时,RNA的上样量一般是多少啊。我刚提的RNA浓度一般是2000ng/ul,我不稀释直接上样10ul的量是不是太多了。再有,如果我稀释成100ng/ul,上样10ul,那加的5X RNA缓冲液是2.5ul还是也要按RNA稀释的比例来减少。最后就是电泳时的电压和时间我选择120V 30min可以么。
申东熙老伯
不稀释直接上上样量太多了,稀释之后用5×loading的量要根据稀释之后溶液的量算,稀释之后的样品体积÷4就是应该要加的5×loading的量。
土井挞克树
一般做rna电泳时建议rna样品加样量在1ug左右,太高容易拖尾
loveliufudan
在RNA非变性琼脂糖凝胶电泳中,上样量和稀释缓冲液的使用需要根据实验目的和具体的琼脂糖凝胶电泳系统而定。以下是一些建议:
1. 上样量:一般来说,RNA的上样量应根据其浓度和琼脂糖凝胶电泳系统的要求进行优化。如果你的RNA浓度为2000 ng/μl,上样10 μl可能偏高。通常,建议根据实验要求和琼脂糖凝胶的尺寸选择适当的上样量,一般范围在100-500 ng之间。
2. 稀释缓冲液:如果你决定稀释RNA浓度至100 ng/μl,并上样10 μl,通常也需要按照相应的比例稀释缓冲液。如果使用5X RNA缓冲液,一般情况下需要按照稀释后的RNA浓度进行比例稀释,例如稀释成100 ng/μl,那么加入2.5 μl的5X RNA缓冲液。
3. 电泳条件:电泳的电压和时间也应根据琼脂糖凝胶的类型和尺寸来确定。对于RNA琼脂糖凝胶,常见的电压范围是100-150 V,并且时间取决于琼脂糖凝胶的尺寸和厚度。选择120 V和30分钟的电泳条件在某些情况下可能是合适的,但最好还是参考相关文献或琼脂糖凝胶系统的说明来确定最佳条件。