浪子在天涯
做时间分辨荧光微球标记时,1%BSA封闭后出现沉淀聚集,轻轻摇晃又溶了,我是用MES缓冲,后面改用PBS复溶,求助原因?
huarenqiang5
主要考虑以下几点原因:
1.缓冲体系PH太低的问题。
2.超声不完全,尤其在喷金前,就很容易出现堵膜现象。
3.活化剂EDC和NHS的用量、还有活化时间、抗体用量、有没有封闭好也都是有可能会造成堵膜的。
4.微径大了,微球浓度过高。
sswei
出现沉淀两种可能性, ph不对,或者偶联时间太长。
loveliufudan
这可能是由于BSA不充分溶解或不适当的pH或离子强度条件导致的。
MES缓冲液在pH5-7的条件下具有最佳缓冲能力,但它可能不太适合于封闭剂,因为它本身是一种亲酸性物质,可能与某些蛋白质结合并导致沉淀。改用PBS缓冲液复溶可能会更好,因为PBS缓冲液具有适当的离子强度和pH值,可以保持微球的稳定性,并且更适合用作蛋白质封闭剂。
此外,如果您的荧光微球标记在复溶PBS缓冲液后仍然出现聚集和沉淀,可能需要优化您的洗涤步骤或采用其他封闭剂来解决这个问题。
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