丁香实验_LOGO
登录
提问
我要登录
|免费注册

荧光微球标记出现聚集现象求助?

相关实验:组织切片的免疫荧光标记实验

user-title

浪子在天涯

做时间分辨荧光微球标记时,1%BSA封闭后出现沉淀聚集,轻轻摇晃又溶了,我是用MES缓冲,后面改用PBS复溶,求助原因?

wx-share
分享

3 个回答

user-title

huarenqiang5

有帮助

主要考虑以下几点原因:

1.缓冲体系PH太低的问题。

2.超声不完全,尤其在喷金前,就很容易出现堵膜现象。

3.活化剂EDC和NHS的用量、还有活化时间、抗体用量、有没有封闭好也都是有可能会造成堵膜的。

4.微径大了,微球浓度过高。

user-title

sswei

有帮助

出现沉淀两种可能性, ph不对,或者偶联时间太长。

user-title

loveliufudan

有帮助

这可能是由于BSA不充分溶解或不适当的pH或离子强度条件导致的。

MES缓冲液在pH5-7的条件下具有最佳缓冲能力,但它可能不太适合于封闭剂,因为它本身是一种亲酸性物质,可能与某些蛋白质结合并导致沉淀。改用PBS缓冲液复溶可能会更好,因为PBS缓冲液具有适当的离子强度和pH值,可以保持微球的稳定性,并且更适合用作蛋白质封闭剂。

此外,如果您的荧光微球标记在复溶PBS缓冲液后仍然出现聚集和沉淀,可能需要优化您的洗涤步骤或采用其他封闭剂来解决这个问题。

提问
扫一扫
丁香实验小程序二维码
实验小助手
丁香实验公众号二维码
扫码领资料
反馈
TOP
打开小程序