落箨成竹1
LPS(1或10 ug/ml)刺激RAW264.7,取24小时的上清测elisa试剂盒,检测炎症因子IL-1β、IL-6、TNFα,测出来的结果,control组和LPS刺激组都没差异性,OD基本一样。刺激后细胞形态、测NO和qPCR也差异挺明显的。谁能解答一下疑惑呢,是选用的elisa试剂盒还是操作步骤有需要注意的地方,不胜感激。
毛利小五郎的徒弟
排除细胞老化的问题的话就是试剂盒失效了
huarenqiang5
主要考虑还是试剂盒的问题,再就是可能本身细胞就分化了,或者刺激浓度还不够。
loveliufudan
如果在进行LPS刺激后,细胞形态、测NO和QPCR结果都发生了明显的变化,但是ELISA检测的炎症因子的浓度却没有发生明显的变化,那么可能有以下几个原因:
实验操作不当:在进行ELISA检测时,如果实验操作不规范,例如洗涤步骤不彻底、标准曲线制备不当等,都可能会导致检测结果不准确。因此,在进行ELISA检测时,一定要注意实验操作的规范性和严谨性。
检测时间点不当:在进行LPS刺激后,炎症因子的分泌不是瞬间发生的,而是需要一定的时间。因此,如果检测时间点选择不当,可能会导致检测结果不准确。一般来说,炎症因子的分泌需要一定的时间,建议在刺激后24小时以上才进行ELISA检测。
LPS刺激浓度不当:在进行细胞刺激时,LPS的浓度也会对炎症因子的分泌产生影响。因此,如果LPS的浓度选择不当,可能会导致检测结果不准确。一般来说,LPS的浓度建议选择适当的浓度范围进行优化。
检测方法的灵敏度不够:有时候,即使炎症因子的分泌发生了一定程度的变化,但是检测方法的灵敏度不够,也可能导致检测结果没有明显的差异。因此,在进行ELISA检测时,要选择具有足够灵敏度的试剂盒,以确保检测结果的准确性。
总之,在进行ELISA检测时,要注意操作规范、选择适当的时间点和刺激浓度,并选择具有足够灵敏度的试剂盒,以保证检测结果的准确性。
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