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本人是做免疫荧光层析的,最近做实验发现一个问题,新采购的抗体,使用含1‰蔗糖的0.02M PBS缓冲液稀释到指定浓度包被到NC膜上,抗体结合被抑制,信号很低;
使用0.02M PBS不含糖的缓冲液包被同样浓度至NC膜上,抗体结合信号很高。
使用的NC膜和标记物都是同一批号的,经过反复验证甚至重新配过缓冲液,最终确定就是糖的作用。
使用的蔗糖,国药家的。
怀疑是糖堵住抗体结合位点,或者蔗糖中含有的杂质使蛋白质变性。
根据怀疑我透析了信号低的那个抗体,把糖透析出去后再测信号恢复高了。
请教一下各位有经验的老师,想了解下原因,希望不吝赐教,谢谢
huarenqiang5
加入蔗糖的免疫球蛋白制品,其测得的抗补体活性(ACA)比未加蔗糖的同一制品为高,其原因与蔗糖所产生的非离子性渗透压降低了补体溶血活性有关。
土井挞克树
蔗糖会促进抗体重叠,对靶点有影响。