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免疫组织化染色实验要注意哪些事项?

相关实验:免疫组织化染色

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1. 苏木素复染时间需要摸索,尤其阳性染色也在细胞核上。

2. DAB显色时间需要达到化,镜下观察达到阳性染色明显但背景不太深。

3. 抗体孵育时间和抗体浓度需要摸索。尤其一抗孵育在4度过夜。

4. 切片脱蜡和水化要充分;加反应液时要覆盖组织充分;每次加液前甩干洗涤液,但又防止干片;用组化笔画圈时尽量画大一点,否则墨水排斥液体,引起片周边干片。

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4 个回答

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秋秋欣欣

有帮助

1、防止假阳性与假阴性,防止操作中的污染;

2、规范操作时阳性与阴性对照选用2种以上同类抗体。目前肿瘤均为相关抗原,特异性不足,多种同类抗原可提高阳性率;

3、正确评价免疫组化的结果,其结果受抗体、特异性与质量、操作、标本固定等多种因素影响;

4、合理选择抗体,既要符合设计要求,又要价廉物美;

5、待检标本抗原保存要好,要求快速、新鲜、充分地固定,福尔马林液固定标本要做抗原修复。

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whilt-shirt

有帮助

1. 苏木素复染时间需要摸索,尤其阳性染色也在细胞核上。

2. 抗体孵育时间和抗体浓度需要摸索。尤其一抗孵育在4度过夜。

3. 切片脱蜡和水化要充分;加反应液时要覆盖组织充分;每次加液前甩干洗涤液,但又防止干片;用组化笔画圈时尽量画大一点,否则墨水排斥液体,引起片周边干片。

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府宅

有帮助

免疫组化染色方法较多,如ABC法,SP法和EV二步法等,如果使用的是SP法,或者ABC法,这时就必须要仔细地选择好连接抗体,第一抗体有单克和多克隆炎分,连接抗体则要根据选用的抗体来进行,例如:第一抗体选用的是单克隆鼠抗人*抗体,连接抗体也要选择相应的免抗鼠IgG,这样才能连接上孵育的时间可在10分钟,20分钟或者30分钟,一般在室温中进行,如果室温低于20℃以下,则可在37℃的孵育箱中进行。

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dxy_gwrp7ndq

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免疫组化的染色过程,除了前面的处理和加入的抗体外,都在PBS的冲冲洗洗中度过,PBS冲洗的正确与否,也是导致最后结果的关键

1.单独冲洗,防止交叉反应造成污染。

2.温柔冲洗,防止切片的脱落。

3.冲洗的时间要足够,才能彻底洗去结合的物质。

4.PBS的PH和离子强度的使用和要求。

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