免疫组织化染色实验要注意哪些事项？

1、防止假阳性与假阴性，防止操作中的污染；

2、规范操作时阳性与阴性对照选用2种以上同类抗体。目前肿瘤均为相关抗原，特异性不足，多种同类抗原可提高阳性率；

3、正确评价免疫组化的结果，其结果受抗体、特异性与质量、操作、标本固定等多种因素影响；

4、合理选择抗体，既要符合设计要求，又要价廉物美；

5、待检标本抗原保存要好，要求快速、新鲜、充分地固定，福尔马林液固定标本要做抗原修复。

1. 苏木素复染时间需要摸索，尤其阳性染色也在细胞核上。

2. 抗体孵育时间和抗体浓度需要摸索。尤其一抗孵育在4度过夜。

3. 切片脱蜡和水化要充分；加反应液时要覆盖组织充分；每次加液前甩干洗涤液，但又防止干片；用组化笔画圈时尽量画大一点，否则墨水排斥液体，引起片周边干片。

免疫组化染色方法较多，如ABC法，SP法和EV二步法等，如果使用的是SP法，或者ABC法，这时就必须要仔细地选择好连接抗体，第一抗体有单克和多克隆炎分，连接抗体则要根据选用的抗体来进行，例如：第一抗体选用的是单克隆鼠抗人*抗体，连接抗体也要选择相应的免抗鼠IgG，这样才能连接上孵育的时间可在10分钟，20分钟或者30分钟，一般在室温中进行，如果室温低于20℃以下，则可在37℃的孵育箱中进行。

免疫组化的染色过程，除了前面的处理和加入的抗体外，都在PBS的冲冲洗洗中度过，PBS冲洗的正确与否，也是导致最后结果的关键

1.单独冲洗，防止交叉反应造成污染。

2.温柔冲洗，防止切片的脱落。

3.冲洗的时间要足够，才能彻底洗去结合的物质。

4.PBS的PH和离子强度的使用和要求。