弧菌接合转移

dxy_jgrx8vf2

2022-06-17

孩子现在在做创伤弧菌的基因敲除。构建了pRE112的重组质粒，测序正确，转到S17-1pir里，测序正确。感受态和创伤弧菌摇到OD600 0.5左右，然后供/受体菌比为4：1、5：1、10：1、20：1，用100微升BHI重悬，30微升每滴点BHI板，28℃24小时。1毫升BHI冲菌，稀释后取100微升涂双抗板，但是一直做不出来。想问问有什么地方有问题，或者可以改进的地方

3 个回答

bamboopiggy

2022-06-20

有帮助

你的双抗没有用错吧？氨苄青霉素(Amp 100 μg/mL)、氯霉素(Cm 25 μg/mL)？如果前面操作都没有问题，考虑一下板子的抗性问题

汤姆卜丽波

2022-06-17

有帮助

OD600可以再大一点，然后把梯度做的再大一点试试

秋秋欣欣

2022-06-17

有帮助

可以试一下30度培养13-20小时看看