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石蜡包埋组织可以提取RNA吗?怎么提取呢?

相关实验:检测凋亡和其他形式的细胞死亡

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是蜜桃麻麻

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3 个回答

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dxywode

有帮助

可以。

1. 自行准备:无水乙醇、生理盐水、二甲苯及无RNA酶1.5mL离心管。

2. 取出析出液和洗涤液,按以下操作:a) 析出液:4.5mL加入25.5mL无水乙醇,混匀;9mL加入51mL无水乙醇,混匀。

b) 洗涤液:9mL加入21mL无水乙醇,混匀;18mL加入42mL无水乙醇,混匀。

c) 配制好的析出液及洗涤液如出现沉淀,可在37℃溶解,摇匀后使用。



作者:清风拂面vv
链接:https://www.jianshu.com/p/15c012fc33b2
來源:简书
简书著作权归作者所有,任何形式的转载都请联系作者获得授权并注明出处。
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府宅

有帮助

可以提取。FFPE RNA/DNA纯化大提试剂盒(FFPE RNA/DNA Purification Plus Kit,54300)可以从提取福尔马林固定的石蜡包埋(FFPE)组织样品中的总RNA(包括microRNA)和基因组DNA。该试剂盒将RNA和DNA依次纯化成单独的组分。能够纯化所有大小的RNA,从大的mRNA和核糖体RNA到microRNA(miRNA)和小干扰RNA(siRNA),

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dxy_gwrp7ndq

有帮助

可以提取。1. 准备:无水乙醇、生理盐水、二甲苯及无RNA酶1.5mL离心管

2. 配制析出液和洗涤液:a) 析出液:4.5mL加入25.5mL无水乙醇,混匀;9mL加入51mL无水乙醇,混匀

b) 洗涤液:9mL加入21mL无水乙醇,混匀;18mL加入42mL无水乙醇,混匀

c) 配制好的析出液及洗涤液如出现沉淀,可在37℃溶解,摇匀后使用

3. 样本处理:a) 取5-8 μm 厚石蜡切片5-10张,60℃放置5分钟,放入装有二甲苯的玻璃瓶中,浸泡10分钟后,用手术刀或刀片,将组织刮下,放入1.5 mL离心管。也可将石蜡切片60℃放置5分钟后,直接放入含1.2 mL二甲苯的1.5 mL离心管,震荡脱蜡10分钟,12,000 rpm室温离心2 min,弃上清。 b)石蜡块:手术刀刮取20-30 mg石蜡包埋组织样本(尽量去除石蜡部分),放入1.5 mL离心管,加入1 .2mL二甲苯,震荡脱蜡10分钟,12,000 rpm室温离心2 min,弃上清。c)福尔马林固定、未包蜡样本:取30 mg样本,用手术刀剪碎,置于1.5 ml离心管中,加入500 μL生理盐水,涡旋振荡20秒, 12,000 rpm室温离心2 分钟,弃上清。重复2次,转步骤6处理

4. 在上述处理过的脱蜡样本管中加入1.2 mL 无水乙醇,旋涡震荡30 秒,12,000 rpm 离心 2分钟,弃上清,注意不要倒掉沉淀,少量乙醇可用吸水纸吸去。

5. 开盖,室温放置5分钟,去除残留无水乙醇。

6. 加入100 μL生理盐水,震荡混匀20秒;加入200 μL裂解液,20μL消化液A,振荡混匀,室温放置5分钟。

7. 加入20 μL消化液B,震荡混匀,56℃水浴90分钟至组织完全消化裂解。(最好消化至溶液中无组织碎片,皮肤、肺脏、子宫等结缔组织较多的切片应适当延长消化时间)

8. 加入500μL析出液,轻轻颠倒混匀,如有半透明悬浮物,不影响RNA的提取与后续实验

9. 将吸附柱放入收集管内,将混合物吸入吸附柱内,静置2分钟,12,000 rpm 离心1分钟,弃管内废液

10. 将吸附柱放回收集管内,加500 μL洗涤液至吸附柱内,静置2分钟,12,000 rpm 离心1分钟,弃管内废液

11. 将吸附柱放回收集管内,12,000 rpm离心2分钟,离去残留液

12. 取出吸附柱,放入新的1.5 mL 离心管内,加入50-100 μL 洗脱液,静置3分钟,12,000 rpm 4℃离心2分钟,收集RNA溶液。提取的RNA即可用实验或-70℃保存

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