府宅
1. 油红O染色液的配制
油红O染色液分储备液和工作液。
①油红O储备液的配方:100%异丙醇100 mL+0.5 g油红O干粉,充分溶解,过滤,4度避光保存。
②油红O工作液的配方:实验前,将储备液与蒸馏水按3:2稀释,过滤(滤纸或极性滤膜配1mL注射器),酒红色且无沉淀。现配现用原则,避免工作液出现沉淀。
2. 60%异丙醇的配制
60%异丙醇的配方:100%异丙醇60 mL+蒸馏水40 mL,4度保存。
二、动物组织的染色方法
1.冰冻切片的制作
关键步骤:
①组织固定:多聚甲醛(4 g干粉+100 mLPBS,为了加速溶解可以加热至60度或加入少量NaOH),4度保存。
②组织脱水:多聚甲醛换10%蔗糖,沉底;换20%蔗糖,沉底;换30%蔗糖,沉底。
③切片过程不做赘述,园子里有相关帖子(油红O染色用组织,例如脂肪肝、脂肪组织,应切10微米,不能太薄)。
④贴片:室温放置一会。
⑤切片保存:-20度保存。
2.组织切片的油红O染色
关键步骤:
①取出冻存的切片,室温回温,蒸馏水浸洗,洗掉包埋剂。
②60%异丙醇浸洗2min(提前润洗一下,便于油红O着色)。
③油红O工作液染色2-5min,具体时间自己控制。
④60%异丙醇调色(建议严格控制时间,时间太长颜色就褪掉了)。这一步可以在显微镜的辅助下进行,调出自己想要的颜色。
⑤调色结束后,立即水洗。
⑥苏木精复染(严格控制时间,1min以内)。
⑦盐酸酒精分化1-5s(严格控制时间,酒精可以溶解脂质)。
⑧流水反蓝。
⑨甘油明胶封片(水性封片剂)
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1、油红O干液的配制:油红O干粉0.4g加入到1 OmL,异丙醇(分析纯)中,密封,置于37℃水浴加温,使其充分溶解,干液可长期室温保存。
2、油红O染液的配制:干液与三蒸水以3: 2比例混合,混匀后过滤,取滤液作为新鲜染液,此染色液2h内使用。
3、细胞处理好后,用PBS洗3次,用滤纸吸去多余水份,50%异丙醇固定1min或10%中性甲醛固定10min,
4、油红O染色液染色10-15min,染色时需加盖,以免异丙醇挥发,染料沉淀;
60%异丙醇洗去多余染液,三蒸水冲洗3次;
5、Mayer氏苏木素复染5-l0min, 1%盐酸分色及返蓝后,三蒸水漂洗1 0min。倒置显微镜下观察并拍照记录。
小布丁瑶瑶
⑴组织用10%甲酸液固定
⑵冰冻切片厚6~10微米。
⑶用玻璃钩把切片捞入60%异丙醇,稍洗。
⑷油红O液加盖染色5~10分钟,60%异丙醇稍洗去多余的染液。
⑸蒸馏水洗。
⑹Mayer苏木精淡染细胞核。
⑺1%盐酸水溶液快速分化,水漂洗10分钟或于稀碳酸锂水溶液促蓝。
⑻贴于载玻片,把周围的水抹干。
⑼阿拉伯胶或甘油明胶封片。
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