免疫荧光背景太强怎么解决

封闭不佳:封闭的目的就是为了减少非特异性的结合，减少背景染色。如果背景太强，可以考虑换种封闭液或者增加封闭孵育的时间。

背景色成因分两方面 一、组织切片因染色过程或组织非特异荧光而出现的背景色 二、拍照时因硬件设施或取景器设置而出现的背景色针对第一种问题有以下几点建议：1. 采用高品质的多聚甲醛固定减少普通甲醛的自发萤光 2. 切片厚度减薄 3. 切片贴片后流水冲洗干净减少杂质荧光 4. 一抗以及二抗漂洗干净！（非常重要） 5. 选用高品质封片介质针对第二种问题有以下几点建议：1. 曝光时间的控制 2. 暗室操作

可能原因：

1.一抗质量不高

2.一抗浓度太高

3.二抗浓度太高

4.封闭不完全

5.封闭液BSA中含IgG

6.洗涤不充分

优化方案（与以上原因相对应）：

1.使用特异性高，效价高的一抗

2.同一样品按zui佳的二抗用量作一抗稀释曲线，以确定zui佳的一抗稀释比例

3.同一样品按zui佳的一抗用量作二抗稀释曲线，以确定zui佳的二抗稀释比例

4.使用二抗来源动物的非免疫血清进行封闭；改善封闭条件

5.使用高纯度（IgG free）的BSA

6.充分洗涤

做一个不加一抗的对照试验，检测一下是不是二抗与切片发生了非特异性反应。