神经肌肉接头部位运动终板的显色

我在做人的肌肉组织神经肌肉接头部位的直接免疫荧光，观察末梢神经和终板形态。取新鲜组织，4%多甲固定，蔗糖脱水，OCT包埋，冰冻切片机切片，35um，用两种本身自带荧光的试剂，一种染末梢神经，在激光共聚焦显微镜下显绿色，而且绿色一直显色很好，另外一种是invitrogen公司的α-Bungarotoxin, Alexa Fluor® 555 Conjugate, 与运动终板上的乙酰胆碱受体结合 镜下应该显红色，但是红色一直 都染不出来，不知道是什么原因，用α-Bungarotoxin染终板时，试过室温40分钟，4度过夜，破膜剂也用了，封片也是抗荧光淬灭剂封片，但红色就是一直出不来，镜下只看到暗红色的一片背景，请教各位，有谁做过这方面的，指导一下，不甚感激，附照片。前面两张图片，中间椭圆形膨胀的部位是不是运动终板呢？第三张图片是肌纤维的图像，可对比看。 中