求RAW264.7，BMDM转染经验分享

对于 RAW264.7 和 BMDM（骨髓源巨噬细胞）的转染，有几种常见的方法可供选择，包括化学转染和电转染。下面是一些转染经验分享和常用条件的建议：

化学转染（使用 Lipofectamine 2000）：

1. 细胞密度：在转染前，确保细胞达到适当的密度，通常是约70-80%的细胞完全覆盖培养皿。

2. 转染试剂：按照 Lipofectamine 2000 的说明书准确配制转染试剂。注意检查试剂的保质期，并在转染前预先验证试剂的适用性。

3. DNA浓度：确定要转染的 DNA 浓度，并根据试剂说明书中的建议加入适当的量。过高或过低的 DNA 浓度可能会影响转染效果。

4. 转染条件：将 DNA 和转染试剂混合，根据说明书中的推荐时间进行孵育。确保细胞在转染混合物中暴露的时间不要太长或太短。

5. 转染混合物制备：将 DNA-转染试剂复合物缓慢滴加到细胞培养皿中，并轻轻摇晃培养皿以确保均匀分布。避免形成气泡。

电转染：

1. 细胞密度：确保细胞达到适当的密度，通常是约70-80%的细胞完全覆盖培养皿。

2. 转染试剂：选择适合电转染的试剂，如电转染缓冲液。请参考相关文献或试剂的说明书，了解正确的试剂使用方法和浓度。

3. DNA浓度：确定要转染的 DNA 浓度，并根据试剂说明书中的建议加入适当的量。过高或过低的 DNA 浓度可能会影响转染效果。

4. 电转染条件：根据所使用的设备和试剂的建议，设置适当的电转染条件，如脉冲电压、脉冲长度和脉冲间隔时间等。

5. 转染混合物制备：将 DNA 与电转染缓冲液混合，确保混合均匀，并在转染前立即使用。

无论使用化学转染还是电转染，注意以下几点：

• 在转染前进行细胞处理和培养，确保细胞健康且在对应的生长阶段。

- 根据实验要求，选择适当的质粒载体或 siRNA 等核酸材料，并在实验设计中包含相应的对照组。

- 进行适当的阳性对照实验，以确保转染方法的有效性。

- 转染后，进行适当的培养和处理步骤，如培养基更换、细胞收集或进一步分析。

请注意，转染条件和方法可能因实验目的、细胞类型和使用的试剂而有所不同。建议在实验前进行文献调研和实验优化，以获得最佳的转染效果。

我转染过，这个细胞很难转染，我最后用病毒转染的

电转染条件是：

对于0.2 cm电转杯，细胞密度为10x10^6 cells/ml，DNA用量为2μg，电转液体积为100μl，电压为180V， 电容为950μF，脉冲时间为10mSec。

对于0.4 cm电转杯，细胞密度为10x10^6 cells/ml，DNA用量为5μg，电转液体积为250μl，电压为275V， 电容为950μF，脉冲时间为15mSec。

转染步骤：

1、BMDM巨噬细胞置于 6 孔板中；

2、密度为 2.5 × 105细胞；

3、细胞转染密度为 70%；

4、10 µL siRNA (100 pmol/mL) 和10ul转染试剂室温混合恒温 15 分钟；

5、然后加入含有 1ml 的正常 DMEM培养基到 6 孔板；

6、24 小时后换成新鲜 DMEM培养基继续培养；