【建议】RAW264.7细胞转染

不知道那些大侠做过,可以一起讨论一下.

我试了几种转染试剂 ( JetpET, Lipofectine), 转染效率都极低。

只有电转的时候,转染效率也至多达到5%.

不知道怎么拿这个细胞做luciferase.

筛选浓度我已经用到1mg/ml了,不知道大家都用的多少?

常规用FUGEGE6效果好点, 想效率高用逆转录病毒!

"筛选浓度"你指什么? G418 我用过1200ug/ml, 1500ug/ml.

对，就是指的G418.

大侠你用过Fugene6吗?转染效率有多少?

我一般都用FUGENE6, 不知道你转的是什么, 大小以及表达的方式, 我三个质粒共转(最大的9K)可以达到15%-20%, zhuan转一个最好能达到60%! (瞬时表达48小时后有时90%!)

Raw264.7 比较sticky! 你处理过程中多注意, good luck!

大侠 , 不好意思再打扰你.

我最近用了fugene6转染，可是效率依然很低，我转GFP只有不到5%的效率。

不知道大侠你的转染条件是怎样的，细胞密度，FUGENE和DNA的比例，

还有FUGENE的用量都是多少？不胜感激！！！！

BOW~~~~~

如果你愿意的话,能不能说说你的实验条件,然后我们来一起找出效率低的原因?

转染的前一天，将细胞分在6孔板中（6-well plate)，可多试几个细胞密度，使转染当天细胞达到60-80 % confluent为最好。

FUGENE6NA可试几个，如6：1， 3：1， 3：2 （ul:ug),加入OPTI medium中使体积达到100ul，混合好放置于室温30分钟，然后直接加入细胞培养基中。大约2-3天后（视细胞生长情况），转入100mm petri-dish, 进行筛选。you can try this condition.

good luck!

大侠们,我摸了50%和80%两个密度.转染前一天传在12孔板里.

FUGENE6和DNA比例为3:1(FUGENE 3ul, DNA 1ug).

细胞一直培养在高糖DMEM里,FUGENE滴于100ulDMEM里后,加入DNA混匀，室温放置30分钟后,加到细胞培养基里(1ml)。

不知道大侠们的效率通常可以达到多少?

60-80%应该没有问题.

这几天一直做这个细胞的转染，一点进展都没有啊，好不容易发现几个绿色荧光的细胞状态还不好，也不知道园子的战友是怎么转的。

请教一下经验先，还有个问题就是转染效率与质粒有关系吗？我一直用jetpei来转，试了好几个细胞密度呵jetpei的量，可是还是没结果。

还就是怎样判断细胞是否在生长对数期，这个是不是还要摸条件还是凭经验观察细胞生长状态啊，我做的瞬转。