【建议】RAW264.7细胞转染
丁香园论坛
不知道那些大侠做过,可以一起讨论一下.
我试了几种转染试剂 ( JetpET, Lipofectine), 转染效率都极低。
只有电转的时候,转染效率也至多达到5%.
不知道怎么拿这个细胞做luciferase.
筛选浓度我已经用到1mg/ml了,不知道大家都用的多少?
常规用FUGEGE6效果好点, 想效率高用逆转录病毒!
"筛选浓度"你指什么? G418 我用过1200ug/ml, 1500ug/ml.
对,就是指的G418.
大侠你用过Fugene6吗?转染效率有多少?
我一般都用FUGENE6, 不知道你转的是什么, 大小以及表达的方式, 我三个质粒共转(最大的9K)可以达到15%-20%, zhuan转一个最好能达到60%! (瞬时表达48小时后有时90%!)
Raw264.7 比较sticky! 你处理过程中多注意, good luck!
大侠 , 不好意思再打扰你.
我最近用了fugene6转染,可是效率依然很低,我转GFP只有不到5%的效率。
不知道大侠你的转染条件是怎样的,细胞密度,FUGENE和DNA的比例,
还有FUGENE的用量都是多少?不胜感激!!!!
BOW~~~~~
如果你愿意的话,能不能说说你的实验条件,然后我们来一起找出效率低的原因?
转染的前一天,将细胞分在6孔板中(6-well plate),可多试几个细胞密度,使转染当天细胞达到60-80 % confluent为最好。
FUGENE6NA可试几个,如6:1, 3:1, 3:2 (ul:ug),加入OPTI medium中使体积达到100ul,混合好放置于室温30分钟,然后直接加入细胞培养基中。大约2-3天后(视细胞生长情况),转入100mm petri-dish, 进行筛选。you can try this condition.
good luck!
大侠们,我摸了50%和80%两个密度.转染前一天传在12孔板里.
FUGENE6和DNA比例为3:1(FUGENE 3ul, DNA 1ug).
细胞一直培养在高糖DMEM里,FUGENE滴于100ulDMEM里后,加入DNA混匀,室温放置30分钟后,加到细胞培养基里(1ml)。
不知道大侠们的效率通常可以达到多少?
60-80%应该没有问题.
这几天一直做这个细胞的转染,一点进展都没有啊,好不容易发现几个绿色荧光的细胞状态还不好,也不知道园子的战友是怎么转的。
请教一下经验先,还有个问题就是转染效率与质粒有关系吗?我一直用jetpei来转,试了好几个细胞密度呵jetpei的量,可是还是没结果。
还就是怎样判断细胞是否在生长对数期,这个是不是还要摸条件还是凭经验观察细胞生长状态啊,我做的瞬转。