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丁香通

在过表达实验中不想让它表达的量太高,如何降低过表达基因的量

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dxy_8yug3t74

求问:目的如标题,目前启动子不能改,蛋白结构上我也不想动,所以就想在载体质粒上启动子和靶基因之间加一个转录抑制序列类似的序列(如原核生物上的沉默子或者弱化子),请问在真核生物细胞上可行吗?序列信息是什么?

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3 个回答

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huarenqiang5

有帮助

通过蛋白泛素化修饰或者用siRNA(或shRN A)干涉处理。

DNA和染色体水平:基因丢失、基因修饰、基因重排、基因扩增、染色体结构变化。

转录水平调控:转录起始、延伸、终止均有影响。原核生物Q借助于操纵子,真核生物Q 通过顺式作用元件Q和反式作用因子相互作用进行调控。

转录后水平调控:真核生物原初转录产物

经过加工成为成熟的mRNA,包括加帽、加尾、田基化修饰等。

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毛利小五郎的徒弟

有帮助

可以加沉默调控基因进行下调的。

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dxy_8yug3t74user-title

大佬,跪求细说一下嘛,十分感谢

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loveliufudan

有帮助

在真核生物细胞中,可以使用RNA干扰(RNAi)技术来实现转录抑制,这是目前应用最广泛的基因沉默技术之一。

RNAi是一种基于RNA分子介导的基因沉默技术,其中小干扰RNA(siRNA)或小干扰RNA(shRNA)可引导RNA诱导的基因沉默(RISC)复合物切割特定的mRNA分子,从而降低靶基因的表达。在基因工程中,可以将siRNA或shRNA序列克隆到表达载体中,以实现基因沉默。

因此,您可以在载体质粒上插入一个RNAi序列来实现对过表达基因的沉默。您可以使用在线工具或商业服务,如Dharmacon或Invitrogen,来设计和合成siRNA或shRNA序列。这些工具可以帮助您设计针对靶基因的RNAi序列,并确定最佳的转染条件。

需要注意的是,RNAi技术在不同的细胞类型和实验条件下可能会产生不同的效果,因此在实验之前需要对RNAi的效果进行初步的验证和优化。

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