［求助］电转化感受态细胞的制备
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最近在做一株高粘性肺炎克雷伯菌的电转化，做了几次都没有成功，考虑第一个原因是这个菌有很厚的荚膜，电转化效率很低。第二个原因是感受态制备过程中的问题，听做过电转化的师姐说感受态制备过程中，用双蒸水和10%甘油洗菌离心后要把上清去除的非常干净，但是我用的这个菌粘性很大，12000rpm离心，菌体也不能很好地沉淀下来，吸去上清时绝大部分的菌也被吸走了，所以为了尽量保留多一点菌体，没有将上清完全除去，这样是否影响电转化的效率？有什么方法能够提高电转化效率吗？
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4 个回答
我不是Abby
有帮助
请问同学，这个问题您解决了吗？
vlinine
有帮助
离心之后先吸出上清，尽量吸干净一些，影响不算太大
balalaLy
有帮助
我做过大肠杆菌和沙门氏菌，感受态制备的过程都是离心后直接用10%的甘油重悬再离心，离心也只是用5000-6000rpm,离心后也没有特意要把上清吸干净。
汤姆卜丽波
有帮助
我之前做沙门菌也碰到过这个问题，就是离心的时候菌体很多都流失了。后面你可以这样，离心之后先吸出上清尽量吸干净，然后把上清再次离心，能保留好多细胞
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