枯草芽孢杆菌电转

电转不长菌有很多原因可能是你机器电压没调好所以没转上，也可能是感受态细胞状态不好了，或者是质粒抗性和平板不一致

电压设置可以调大一点，还有就是质粒是测序过得么，要保证质粒没问题

有以下方案，老师对照一下

枯草芽孢杆菌电转化方案
1 感受态细胞的制备
1.1 从新鲜培养的平板上接种一单菌落至3 ml B2液体培养基中，试管（17×100 mm）。
1.2 250 rpm，37℃培养过夜（16 h）。
1.3 接种1.5 ml过夜培养的种子至150 ml（装于1L的三角瓶中）新鲜的B2培养基中，200 rpm，37℃培养，至菌数达到～1×108 cells/ml。
1.4 将菌液冰水浴15 min，然后转移至250 ml的离心杯中，12,000 g，5 min，4℃离心收集菌体。
1.5 吸去上清，菌体保持在冰水浴中。
1.6 用250 ml冰冷的无菌水重新垂悬菌体，然后12,000 g，5 min，4℃离心去上清。应该用250 ml的无菌水洗涤2次以上。
1.7 将洗涤后的菌体垂悬于25 ml冰冷的10%的甘油中，转移至30 ml的离心管中，12,000 g，5 min，4℃离心去上清。
1.8 重新将菌体沉淀垂悬于2 ml 10%的甘油之中，细胞浓度～1×1010 cells/ml。
1.9 将感受态细胞分装于1.5 ml的离心管中，每份250 ul，超低温速冻之后，于-70℃保藏。可以保持几个月不失效。
2 电转化
2.1 在一个1.5 ml的离心管中加入DNA样品（5 ng～2 ug，～3 ul）。
2.2 室温下几分钟的时间融化感受态细胞，然后在加好DNA样品的管子中各加入50 ul感受态细胞，抽吸几次混匀。
2.3 室温下温育30 min。
2.4 设置仪器参数。
2.5 将菌体转移到0.2 cm狭缝的电转化杯中，轻弹几下杯子让样品沉到底部。装好杯子。
2.6 电击一次。
2.7 电击完毕取出杯子并立即加入1 ml SMMP溶液（含有亚浓度的相应抗生素）。温和地将其转移至试管（17×100 mm）中，37℃，250 rpm，复苏 1h。
2.8 查看和记录电击参数，时间常数应该在2.5 ms左右，记录场强（kV/cm）。
2.9 涂布相应的LB抗性平板，37℃培养36～48 h。