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dot blot实验求助

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Sssssz

各位老师,想问一下dot blot实验的标曲为什么出现这种情况,点的中心是空白的,我用的是尼龙膜,加样3微升,一抗1:1000,二抗1:5000,ECL孵育5min后曝光30s,不知道是那一方面的问题

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