1✖️上样缓冲液loadingbuffer为啥可以裂解细胞？提取蛋白

loading buffer的主要成分是SDS,甘油,溴酚蓝,TRIS,其中甘油的作用是使样品沉到点样孔中而不漂浮起来,SDS是结合蛋白质,使所有蛋白质所带电荷性质一样,但不同分子量的蛋白结合的SDS数量是不一样的.溴酚蓝是指示剂,可以用来观察大概的电泳过程,因为它在不同浓度的胶中泳动的速率不一样,从而也可以看做是一个蛋白样品,这样就可以直观的大概了解蛋白泳动到了哪个位置,

Loading buffer的作用

Loading buffer即常用的电泳上样缓冲液，工作浓度是1X 。由于点样孔容量有限，所以如果你样品浓度过高可以用低倍数，样品浓度低就用高倍数，以便load更多的样品。1.核酸电泳中loading buffer的作用：（1）指示作用：内含剂溴酚蓝和二甲苯氰，显示电泳的进程，以便适时终止电泳；a. 溴酚蓝：前面的紫蓝色条带，在0.6%、1%、1.4%和2%琼脂糖凝胶电泳中，溴酚兰的迁移率分别与1Kb、0.6Kb、0.2Kb和0.15Kb的双链线性DNA片段大致相同；b. 二甲苯氰：后面的蓝色条带，它在1%和1.4%琼脂糖中电泳时，其迁移速率分别与2Kb和1.6Kb的双链线性DNA大致相似；（2）沉降样品：成分甘油可以加大样品密度，使沉到点样孔中防止样品飘出；（3）变性聚合酶：SDS主要是促使聚合酶变性，避免其结合在DNA双链上影响迁移速率。2.蛋白电泳中，蛋白样品在定量完毕，经过loading煮完后，可以相对稳定保存，loading buffer在蛋白电泳中的作用：（1）溴酚蓝指示电泳位置、使样品沉入点样孔；（2）内含还原剂破坏二硫键，而不会破坏蛋白质的一级结构，不影响WB检测，因为WB主要只是测蛋白表达量，而不需要蛋白的高级结构；（3）使SDS与蛋白按比例结合，使蛋白表面均匀带上负电荷（具体原理参考https://www.jianshu.com/p/1d1358ed6bf9里面的SDS lysis buffer部分）;（4）煮沸使蛋白酶失活，中止酶促反应，防止提取的蛋白质降解；（5）煮沸使DNA充分打断变性；

loading缓冲液不能裂解蛋白，只能在蛋白提取后跟蛋白一起煮沸进行WB实验。裂解蛋白的是RIPA