考马斯亮蓝（兰）R-350是什么呀，怎么和R250、G250区别呀？实验时怎么选择，原理是什么

考马斯蓝R-250和G-250染料是考马斯染料的两种最常见的化学形式，是二磺化的三苯基甲烷化合物。R-250（红色）缺少以G-250（绿色）形式存在的两个甲基。“250”最初表示染料的纯度。

考马斯蓝染色原理：

不同的颜色是染料分子不同带电状态的结果。

当pH值小于0时，考马斯蓝G250染料会腐蚀所有带正电荷的三个氮原子，颜色为红色最大吸收波长为465nm。当pH值约为1时，染料的总电荷为+1（2-磺酸基团带负电，因为它们的pKa极低），所以染料是绿色的，具有吸收能力最大值为620nm，而pH值高于2时，染料为亮蓝色，最大值为595nm。在pH值为7时,二苯胺部分带正电荷，总电荷为1，染料消光系数为43 000 M1厘米1.

染料与蛋白质的氨基和羧基（非共价）静电相互作用，因此主要来自碱性氨基酸（主要是精氨酸、赖氨酸、组氨酸），以及疏水性氨基酸（苯丙氨酸，酪氨酸、色氨酸）。当在pH=3.0的0.01M柠檬酸盐缓冲液中溶解时，考马斯的最大吸收波长为555nm；蛋白质-染料复合物的特征是峰略宽于游离染料的峰，最大值为549nm。

考马斯凝胶染色剂和布拉德福德蛋白质分析试剂是以25-50%甲醇中的极酸性溶液配制的。在酸性条件下，染料主要通过碱性氨基酸（主要是精氨酸、赖氨酸和组氨酸）与蛋白质结合，而络合物的形成稳定了产生蓝色的染料的负电荷阴离子形式。每个蛋白质分子结合的考马斯染色配体的数量约为与蛋白质上发现的正电荷数成正比。蛋白质结合导致染料从红棕色至亮蓝色（最大吸收波长为595nm）。

考马斯蓝G-250染料的水溶性在胶体考马斯染色方案中得到了很好的应用。

考马斯亮蓝R-350是一种常用的蛋白质染色剂，可用于凝胶电泳和蛋白质定量等实验中。与R-250和G-250相比，它具有更高的灵敏度和更低的检测限。

在实验中，选择染色剂应根据实验需要和样品特性进行选择。如果需要检测低浓度的蛋白质，考马斯亮蓝R-350是更好的选择，因为它具有更高的灵敏度和更低的检测限。如果需要检测高浓度的蛋白质，可以选择R-250或G-250，这两种染色剂在高浓度下具有更好的线性范围。

考马斯亮蓝染色的原理是利用染色剂与蛋白质之间的静电相互作用和氢键作用，这种作用使得染色剂与蛋白质结合并出现颜色。考马斯亮蓝R-350、R-250和G-250均是阴离子染色剂，可以与蛋白质的阳离子基团结合形成复合物。考马斯亮蓝染色后，蛋白质会呈现出蓝色或紫色，并显现在凝胶上，从而便于蛋白质的可视化和定量分析。

总之，选择染色剂应根据实验需要和样品特性进行选择，考马斯亮蓝染色原理是利用染色剂与蛋白质之间的静电相互作用和氢键作用，从而实现蛋白质的染色和可视化。

考马斯亮蓝350是双相电泳相关试剂。考马斯亮蓝g250和r250的区别

在用途的区别: 考马斯亮蓝R250是通过范德瓦尔键与蛋白质结合,染色灵敏度比氨基黑高5倍,适用于SDS电泳微量蛋白质染色。考马斯亮蓝G250在三氯乙酸中不溶而成胶体,能选择地染色蛋白而几乎无本底色,所以常用于需要重复性好和稳定的染色,适于作定量分析。

参数不同: 考马斯亮蓝G250比考马斯亮蓝R-250多二个甲基。

用途和染色后的颜色都不一样。

1. R250、R350一般用于 染蛋白，G250 一般测蛋白浓度，也可染胶，敏感性更高但较慢脱色较难。
2. G250常用的蛋白染料，作定性试验用，染色后为蓝绿色；
3. R250较敏感,，做定量实验用，染胶效果较好，染色后为红蓝色。

后者在结构上比前者多两个甲基。名字中的“G”是绿色的缩写，因为考马斯亮蓝G250的蓝色染料是浅绿色；名字中的“R”是红色的缩写，因为R250的蓝色染料是微红的。在生化实验中，考马斯亮蓝R250常用在蛋白质定量和蛋白质电泳中的蛋白质染色。工作原理是：考马斯亮蓝R250经过蛋白质中氨基和羧基之间的静电结合和范德华力与蛋白质形成强但非共价连接的复合物。蛋白质染料复合物的形成稳定了染料携带的带负电荷的阴离子（例如磺酸基团），从而在膜或胶上产生肉眼可见的蓝色。考马斯亮蓝R250多用于电泳蛋白的染色，染色灵敏度相比氨基黑要高出5倍，可达0.1μg蛋白。考马斯亮蓝R250染色后，需要先褪色再观察蛋白条带。

考马斯亮蓝R250（红色染成蓝色）电泳（更灵敏：可以检测到0.1微克蛋白质），考马斯蓝G250（浅绿色蓝色）用于溶液中的蛋白质分析（方便-可溶）。两者都可以用于每种应用中，但是它们可以互换使用，因为它们可以将蛋白质染色成不同的强度和颜色。