求助！蛋白大小在7kda左右做WB的转膜电压还有时间应该在多少啊

一般转膜的电流在200mA-400mA之间，转膜时间为30-60分钟。也可以在15-20mA转膜过夜。小片段的可以用250mA。

一般转膜电压110mV，时间60分钟左右。

对于分子量约7kDa的小蛋白Western Blot的转膜,我的建议是:

1. 转膜电压:15V左右,不要超过25V。小蛋白易穿膜,电压过高会使其迁移过快,影响分离。

2. 转膜时间:30-60分钟为宜。时间过长也可能导致小蛋白跑脱。

3. 考虑使用较小孔径的PVDF膜,如0.22μm,可提高分辨率。

4. 转移缓冲液配方中可以适当增加甲醇含量,例如15-20%,有助于小分子蛋白的转移。

5. 转移过程中需要持续冰盒冷却,防止发热降低蛋白迁移率。

6. 建议转膜结束后用Ponceau S染色检查膜,确认蛋白是否转移完好。

7. 均匀转膜非常重要,可使用转膜增强剂辅助。

综合来说,低电压、中短时间、低温条件,辅以增强剂等,可以提高7kDa小蛋白Western Blot的转膜效果。请根据蛋白特点优化转膜条件。