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丁香通

wb真的是玄学—wb条带不均匀

相关实验:蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)

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亦此中人

最近跑胶所有条带都不均匀,各种参数都没有变,在孵膜的时候留意过marker是均匀的,转完膜后肉眼可见膜上的maker都不均匀了。转膜条件是250mA 60mi 小分子 120min大分子,一直冰水浴降温的。

大家有碰到过类似情况么?要怎么解决

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4 个回答

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skyye

有帮助

这个首先还是考虑是胶不均匀的问题。配胶时各成分需要充分混匀,配好胶后尽快使用,在4℃保存不超过一周

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balalaLy

有帮助

可能的原因:膜上面有杂质,比如封闭不充分,封闭液没有溶解好残留的颗粒,膜没有完全激活,导致膜结合蛋白的能力不均,蛋白裂解液中有杂质。

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毛利小五郎的徒弟

有帮助

感觉是分离胶的浓度不合适,可以下调一下分离胶浓度

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sswei

有帮助

原因1:胶凝固不均匀。

原因2建议:可能是由于拔梳子导致样品孔不齐。

建议先用小电跑,尽量让条带跑齐,再换大电压。板和架子没合严,两板之间的液面一部分已经低于薄板完成了部分断路,跑一会停一下打开看看,补下缓冲液试试。


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