科研打工修勾
有老师帮忙看一下吗?
上样量是每个孔5ug蛋白
5%脱脂奶粉封闭一个小时
一抗说明书是1:2000~1:10000
选择稀释比例是1:8000;
TBST洗膜,洗5次,每次3分钟
抗体说明书的的条带位置在56kDa,实际做出来未见目的蛋白反而出现特别多的其他条带,
feixue7758527w
我觉得你的样本首先要适度纯化。
然后分离机胶可以换一个浓度试试。换成小浓度分离胶试试。然后洗脱时间加长一点。
huarenqiang5
建议提高蛋白上样量在10ug以上试试。
balalaLy
蛋白上样量太低了,一般是10-20ug。另外,抗体的浓度可以再优化一下。
毛利小五郎的徒弟
可能是封闭不足,洗膜没洗干净,建议多封闭一下。
洗膜的时候多洗几次。