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关于使用三氯醋酸沉淀法,如何解决蛋白质难于重悬?

相关实验:免疫共沉淀(Co-IP)

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guofei11227

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2 个回答

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土井挞克树

有帮助

考虑是体系中脂类\酚类杂质较少,所以三氯醋酸没办法实施重悬,可以考虑离心沉淀

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loveliufudan

有帮助

以下是一些可能的解决方案:

增加重悬缓冲液的含量:将重悬缓冲液的体积增加,可以减少蛋白质在溶液中的浓度,有利于重悬。通常,可以将重悬缓冲液的体积增加到蛋白质沉淀物的5-10倍。

增加重悬缓冲液中的蛋白质还原剂:将重悬缓冲液中的蛋白质还原剂浓度增加,有助于蛋白质的还原和重悬。常用的蛋白质还原剂包括二巯基乙醇(DTE)和二巯基丙酸(DTT)等。

增加重悬缓冲液的pH值:增加重悬缓冲液的pH值可以改变蛋白质的电荷性质,有助于重悬。通常,可以将pH值调整到7.5-8.5左右。

增加重悬缓冲液的混合时间和温度:在重悬缓冲液中加入蛋白质沉淀物后,可以通过增加混合时间和温度,有助于蛋白质的重悬和溶解。一般来说,可以在37℃下轻轻摇晃或震荡样品30分钟到1小时。

使用超声波:对于难于重悬的蛋白质样品,可以使用超声波来帮助重悬。超声波能够破碎样品中的蛋白质聚集体,有助于蛋白质的溶解。需要注意的是,超声波的使用需要注意功率、时间和距离等参数。


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