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WB条带比预测分子量大,公司建议去糖基化

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nomoresc

跑一个小分子蛋白,抗体官网的预测分子量是11kDa,但是我跑出来在37kDa左右,用15%的胶跑了几次,条带一直是三十多的位置,此图是用4-20%的预制胶跑的,还是这个位置。公司说可能是发生了糖基化修饰,建议用去糖基化的酶,但是我看产品说明书,感觉都是用于纯化蛋白,从组织里提取的蛋白要怎么去糖基化?

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2 个回答

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橙汁儿青柠味

有帮助

首先蛋白条带过大可能是存在修饰,但得确定是否是糖基化修饰,提完的蛋白按照它这个步骤操作是可以的

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loveliufudan

有帮助

对于组织提取的蛋白质,可以使用商业化的去糖基化酶(如PNGase F)进行处理。首先将蛋白样品与去糖基化酶一起孵育,酶会将蛋白质上的糖基转化为非糖基化的形式,从而使得蛋白质的实际分子量与预测的分子量更加接近。不过需要注意的是,去糖基化酶并不能保证完全去除所有的糖基化修饰,而且有些蛋白质在糖基化修饰的情况下才具有生物活性,因此在处理之前需要对其进行评估和权衡。

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