请教一下普通WB做泛素化条带应该怎么设计实验呢

如果您想检测p53的泛素化，可以将细胞或组织样品进行裂解，然后用p53抗体进行免疫共沉淀（IP），将泛素化的p53捕获下来，最后通过WB检测泛素化的产物。具体实验步骤如下：

细胞或组织样品的裂解：将培养细胞或组织样品加入裂解缓冲液中，加入蛋白酶抑制剂，离心裂解液去除细胞碎片和细胞核。

免疫共沉淀：将裂解液加入p53抗体预先吸附的蛋白A/G琼脂糖糖珠中，免疫共沉淀泛素化的p53蛋白。如果您的样品中p53蛋白表达较低，则可以考虑使用p53标记的人工合成蛋白进行免疫共沉淀。

WB检测：将共沉淀得到的泛素化产物用SDS-PAGE进行分离，然后通过WB检测泛素化条带。在WB检测中，可以同时使用泛素抗体和p53抗体进行双重检测，以确认检测到的泛素化产物是否为p53泛素化产物。

需要注意的是，实验中的抗体浓度、抗体选择和质量、裂解液的成分等因素都可能影响泛素化条带的清晰度和特异性，因此实验过程中需要仔细调试。

泛素化一般有两种实验设计，一种是内源性实验，用p53抗体去IP，然后显影内源性的泛素化 UB条带，另外一种是转染带标签的质粒，比如p53-flag和UB-ha，这样子可以用flag去IP，然后显影ha的泛素化条带

如果你的实验类似于图中建议你选择p53一抗，成功率高，理论上也可以选择泛素化上下游其他环节的抗体，但成功率不高