细胞培养液中蛋白提取

可以使用超声波法与玻璃珠研磨法结合提取真菌孢子分泌的蛋白质。

酚抽提法

1 在液氮中将 1g 菌体研磨为粉末

2 加入 6 ml 水饱和酚（buffer-saturated phenol）和 2 ml提取液（20mMTris-Cl, pH 7.5, 0.5% Triton X-100 (v/v), 0.5M EDTA, pH 7.5, pH 8.0,0.07% β－巯基乙醇, protease inhibitors）。

3 在4度混合30分钟。

4 12000 rmp 离心1min，使两相分开。

5 弃沉淀，吸取上层的苯酚相，加入5倍体积的冷丙酮，-20度沉降2h。

6 12000 rmp，4度，离心15分钟沉淀蛋白，弃去上清。

7 沉淀干燥至丙酮挥发完全。

真菌孢子分泌出来的蛋白质通常可以通过以下步骤进行提取：

收集和清洗孢子：将真菌培养液离心，收集并用PBS等缓冲液清洗孢子，以去除残留的培养液和其它杂质。

孢子破碎：将清洗后的孢子在液氮中冷冻并研磨成粉末，或使用高压均质器等设备将孢子破碎，释放出孢子内部的蛋白质。

提取蛋白质：将孢子粉末或破碎后的孢子用适当的缓冲液或提取剂进行提取。常用的蛋白质提取方法包括直接浸泡法、超声波法、异丙醇沉淀法、酸性异丙醇沉淀法、硫酸铵沉淀法等等。

蛋白质分离和纯化：根据需要，可以对提取的蛋白质进行分离和纯化。例如，可以使用离心分离、柱层析、电泳等技术来纯化目标蛋白。