高效液相色谱待测样品浓度确定

在高效液相色谱中，可以通过内标法来确定待测样品和对照品的浓度是否适合检测。内标是已知浓度的化合物，它与待测样品一起进入色谱柱进行分离。在分离后，可以通过内标的峰面积与待测样品的峰面积之比来计算待测样品的浓度。另外，对照品浓度与峰面积之比等于样品中浓度与峰面积之比，由此可以计算出样品的浓度。

样品浓度选择需要先确定最高点和最低点，然后在此区间进行实验。

样品浓度最高点的要求主要看色谱柱的承受能力。过高的样品浓度会对柱子产生一定的负荷，一来柱子会有所损伤，二来分离效果也会受到影响。当然要考虑物质的溶解性，与流动相接触瞬间是否有可能析出等问题。

最低点主要还是看实验者对样品的要求。什么样的浓度都是在固定时间出峰，在该位置收集溶液即为你所要求的物质。但是在得到溶液后如何能够提取并纯化，在适当的收率的情况下是否能得到你所期望的物质量。

在制备角度来看，还是应该在不影响分离的情况下将样品浓度尽量提高，同时要考虑色谱柱的承受能力和分离效果及纯度等问题

首先确定样品成分，获取该成分的纯品（对照品），将对照品溶液配制成与样品成分浓度相当的浓度（比如样品浓度是10mg/ml左右，对照品溶液就配制成10mg/ml）。对照品溶液和供试品溶液分别进样，进行色谱分析，获得对照品成分峰面积与供试品溶液峰面积。此时已知对照溶液峰面积，对照溶液浓度，供试品溶液峰面积，求供试品溶液浓度，因为成分在液相中响应值不变，故对照品溶液浓度/对照品溶液峰面积=F（即响应因子）=供试品溶液浓度/供试品溶液峰面积，求得供试品溶液浓度。

如果想算含量，含量=[（浓度X稀释倍数）/供试品称样量]X100%