高效液相色谱

互联网2014-10-21

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　　高效液相经常使用粒径5um 的色谱柱，用过一段时间后，柱压会略有升高，尤其是做中药。常用来洗色谱柱的溶剂为甲醇，当色谱柱用甲醇洗过之后，再用含乙腈的流动相平衡，会使柱压迅速升高，色谱柱滴漏，这是由于甲醇和乙腈汇合产生局部高压。因此，这种情况下，应慢慢升高流速，可以从0.6ml/min开始，一步步的平稳柱压，防止色谱柱漏液。可能是因为：ODS柱上有未完全硅烷化的羟基，与甲醇结合性好，当遇到乙腈时，乙腈慢慢取代甲醇的位点，但是乙腈没有羟基，结合性比甲醇差，所以产生了局部高压.
　　195-210mn之间的末端吸收的波长下检测，干扰极大，往往得不偿失，除非灯是新装上的。可以考虑用ELSD检测器，属于通用型检测器，只要条件控制得好，结果一般都很理想。而且ELSD可除去溶剂和流动相的干扰，要知道甲醇在205nm时，吸收度为0.667.在用ELSD做标准曲线的时候，不一定呈线性关系.

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