Gene_bunny
用的是10%的牛奶常温封闭2h,一抗1:500过夜,TBST洗7次,每次5分钟,二抗1:5000后也是TBST洗7次,每次5分钟。
balalaLy
可能是蛋白表达本来就比较低,另外tbst洗的次数太多了,建议提高tbst中土温的浓度,减少洗的次数
z流沙z
首先可以增加上样量,是目的条带更明显,另外一抗二抗也可以使用5%牛奶配制
loveliufudan
可能是以下几个原因导致的:
蛋白样品中有非特异性结合:如果蛋白样品中存在与次要抗体结合的非特异性成分,这些成分可能会与二抗结合,导致背景信号的出现。
一抗或二抗过度稀释:如果一抗或二抗过度稀释,可能会导致不完全结合,从而导致背景信号的出现。
特定蛋白结构的存在:某些蛋白质可能会形成特定的结构,这种结构可能会被次要抗体结合,从而导致背景信号的出现。
不充分的洗涤:洗涤步骤中的TBST洗涤液不够充分,可能会导致非特异性结合或次要抗体结合,从而导致背景信号的出现。
土井挞克树
是因为抗体特异性差,更换特异性高的抗体就好了
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