WB检测磷酸化蛋白的疑问？

1.通常在检测磷酸化蛋白的电泳实验中，上样量的选择应该根据所用的样品种类和磷酸化蛋白的表达水平来确定。一般来说，上样量会在10-50 μg之间，但也可以根据需要进行优化。如果表达水平较低，可以考虑使用富集技术或增加上样量，而如果表达水平较高，则应注意避免过度载入以避免产生饱和效应。

2.对于出现杂带的问题，可以尝试以下几种方法进行解决：

优化抗体浓度：可以通过调整一、二抗的浓度比例，或者减少一、二抗的浓度来解决杂带的问题。

优化样品处理：确保蛋白样品处理充分，可以使用新鲜的样品或更换不同批次的抗体，同时注意避免悬液的过度稀释。

优化电泳条件：优化电泳条件也可以解决杂带问题，例如减少电泳时间、调整电泳电压、调整电泳缓冲液等。

鉴别杂带来源：如果杂带的来源是蛋白本身的降解或多聚体，可以通过选择更加纯净的样品或使用其他检测方法进行鉴别。

大孔的量是10微升，小孔是5微升。

大家检测磷酸化蛋白，电泳的是上样量一般上10ug-20ug