WB条带不整齐，背景很脏，条带在上方想没跑下来一样

转膜条件不对？转印电极芯坏了？

封闭液没有配对？

显影液不新鲜？没加均匀？

先染胶排除蛋白和电泳问题。再看转膜 封闭 抗体问题。

可能有以下几个原因：

蛋白质收样不纯或者含量不足：建议使用较高纯度的蛋白质样品进行Western blotting，或者尝试使用更多的样品以增加蛋白质的含量。

蛋白质电泳时，载样量不均匀或者载体不够平整：建议载体上加样均匀，载体平整，不要载入过多的样品以防止出现横向扩散的情况。

蛋白质电泳不充分：建议延长电泳时间，以确保蛋白质完全分离。

蛋白质转膜不充分：建议使用正确的转膜条件，包括Western转膜液的配制和转膜时间等。

第一次抗体浓度过低或过高：建议优化第一次抗体浓度，建议根据不同抗体调整抗体浓度。

背景太脏了，更换特异度高的抗体