免疫沉淀实验干扰的排除方法？

在免疫沉淀实验中，有时候靶蛋白的大小与重链或轻链相近，会影响靶蛋白的检测。针对这种情况，有一些方法可以尝试：

使用预先交叉吸附（Pre-Clearing）：在进行免疫沉淀之前，先用抗体（不是用于靶蛋白的抗体）与细胞裂解物进行结合，通过离心将这些抗体结合的蛋白质沉淀掉。这样可以减少重链和轻链的干扰，提高靶蛋白的检测灵敏度。

选择性减少重链或轻链的信号：使用特异性抗体或是特异性减少重链或轻链信号的方法。例如，使用特异性重链抗体或者是选择性降解或抑制特定的重链或轻链可以减少干扰信号的影响。

利用不同来源的抗体：由于重链和轻链的序列在不同物种之间可能存在差异，可以使用来自不同物种的抗体来减少干扰信号。例如，对于鼠标样本，使用来自兔子或羊的抗体可能会更好地减少鼠标的干扰信号。

调整显影的时间和浓度：通过调整显影的时间和浓度，可以让靶蛋白的信号更明显，同时减少干扰信号的影响。需要注意的是，如果显影时间太长，会导致非特异性信号增加，需要根据实际情况进行调整。

总之，对于免疫沉淀实验中靶蛋白与重链或轻链大小相近的情况，可以尝试上述方法来减少干扰信号的影响，提高实验的准确性。

建议把轻链和重链分离，然后把目标蛋白纯化可以有效排除干扰

选择WB一抗时，选择和IP用一抗不同的种属，避免IP一抗的干扰。选择只和重链或轻链反应的二抗。

可以跑多一块胶，wb不加一抗作为对比。如果都有条带可能就得换抗体了