抗原包板的ELISA用于检测血样中抗体效价，OD值要如何进行分析？

OD全称optical density，也就是光密度，也可以称为吸光度。吸光度指的是利用物质特有的吸收光谱，来鉴别物质或者测定物质的含量，也就是将一束特定波长的光通过被检测物，被检测物可以将光吸收掉一部分，通过吸光度计算被检测物的浓度。一般被检测物浓度越高，吸光度的值就会越高。实验中也是利用“OD值”和被检测物的浓度之间的关系来根据吸光度。

最需要注意的就是测量时的光波长。上文在介绍“OD值”概念时提到，吸光度利用的是物质特有的吸收光谱，实际操作中我们需要注意的最关键的也是这一点，不同物质的吸收光谱不同，最大吸收峰的波长也不同，为了达到最好的测量效果，一般来讲，我们需要在待测物质的最大吸收波长处来检测其“OD值”。例如，核酸在260nm波长处光吸收最大，而蛋白和酚类物质则在280nm波长处光吸收最大；BCA法检测蛋白含量时，显色反应后，溶液由浅绿色变为紫色，此时在560nm处有最大光吸收值；TMB法显色的ELISA实验，在加入终止液后溶液由蓝色变为黄色，在450nm处有最大光吸收。

除了吸收波长，一些实验还需要设置校正波长，校正波长往往远离最大吸收波长，作为本底吸收，排除由于气泡、灰尘等其他系统误差造成的“OD值”偏差。根据测得的“OD值”，进行双波长校正，可以有效的减少系统误差造成的影响。

对于测量得到的待测样本“OD值”还需要进行换算才可以得到最终的浓度，需要注意的地方也比较简单，就是根据对应试剂盒的说明书，采用推荐的曲线拟合方式进行拟合，拟合后需要看一下拟合曲线的R2值，约接近1证明曲线拟合度越高，结果越可信。如果R2值较低，则需要检查是否出现标准品稀释问题或实验操作出现失误。拿有些试剂盒来举例，BCA 蛋白定量试剂盒，此款试剂盒推荐的标曲拟合方式就是直线拟合，而ELISA试剂盒系列产品，则推荐用四参数拟合方式进行标曲拟合。选择错误的拟合方式，会影响曲线拟合度，R2值较低，回归计算的待测样品浓度也不准确。温馨提示：BCA蛋白定量实验以及ELISA实验的显色过程都是受反应时间及温度等条件影响的，需要根据实验情况及时终止实验进行读数，做实验时尽量不要走开。

抗原包板的ELISA用于检测血样中抗体效价时，可以通过OD值进行分析。具体分析步骤如下：

准备一系列稀释的血清样品，例如1:10、1:20、1:40等等，以便进行效价曲线的绘制。

在包有抗原的ELISA板上加入不同稀释倍数的血清样品，每个样品要设置至少两个重复孔位。

加入与样品配对的二抗（一般是抗目标物种IgG或IgM的二抗），然后加入底物（如TMB或ABTS）。

在反应结束后，使用酶标仪测量各孔位的OD值，并以无血清样品为背景进行校正。

根据OD值的变化，绘制效价曲线。一般以血清稀释倍数为横坐标，OD值为纵坐标，绘制S型曲线，取效价中间区域（如1.5-2.5）的OD值平均数作为效价单位。

通过比较各样品对应的OD值和效价曲线，可以确定血清中抗体的效价。

需要注意的是，ELISA实验中的OD值受到多种因素的影响，如反应时间、温度、洗涤次数、试剂浓度等等。因此，应该在实验过程中控制这些因素，并使用合适的质量控制方法进行质量控制。