COIP实验中INPUT无目的蛋白，pulldown中能砸到目的蛋白，why？

主要考虑以下几点：

（1）样品中目的蛋白未表达或者表达量低。这种 情况下建议确定目的蛋白的蛋白谱，确定它会表达。

（2）可以适当增加裂解液，但要注意后续要将裂解液去除干净。

（3）抗体使用量少，没有足够的抗体去捕获目的蛋白。建议增加抗体的使用量。

（4）缓冲液、洗脱液的pH可能不能将目的蛋白洗脱。建议根据想要洗脱的蛋白质，调整溶液正确的二pH值。

（5）抗体没有与免疫吸附磁珠结合。注意查看磁珠与抗体亚型是否匹配。

可能是你的蛋白存在降解，所以检测不到

在COIP实验中，INPUT是用来作为背景对比的样品，用于确认在免疫共沉淀(pull-down)步骤中检测到的目的蛋白是否是特异性结合的。因此，INPUT样品中并不含有目的蛋白。如果在pull-down步骤中检测到了目的蛋白，说明该蛋白与与某些结构或蛋白复合物相互作用，并与免疫沉淀剂相互作用，从而被成功沉淀下来。这通常是因为目的蛋白在细胞中存在于蛋白复合物中，或者与其他结构或蛋白质非特异性相互作用导致的。因此，在分析pull-down结果时，需要进行合适的对照实验，以区分特异性和非特异性结合。

蛋白表达量低，input做不出来，经过IP富集后蛋白浓度高了，可以杂出来。提高input蛋白量