WB实验曝光后背景脏以及一些黑点点可能是什么原因导致的？

洗膜时间不够，可以增加洗膜次数或者延长洗膜时间，或者增加洗膜液吐温用量试试

不规则的黑点和黑乎乎的一片可能是由于多种原因导致的。

一个可能的原因是蛋白质本身的污染。如果样品中存在高分子量的杂质，这些杂质可能会在印迹过程中沉积在纸张上，导致不规则的黑点和黑乎乎的一片。如果您发现了这种情况，可以尝试将样品经过超滤或其他方法以去除杂质。

另一个可能的原因是印迹过程中的问题。例如，如果您在印迹过程中使用了过多的染料或印迹时间过长，可能会导致过多的染料沉积在纸张上。同样，如果您在印迹过程中使用的染料过时或未正确储存，也可能会导致这种情况。

其他可能的原因包括：放射性染料的污染、蛋白质过度氧化、印迹条件不当（例如温度过高或湿度过低）、仪器故障等。

建议您仔细检查您的实验过程，尝试确定导致这种情况的具体原因。

考虑原因：膜上其他部位与一抗或者二抗非特异性结合。

解决办法：封闭牛奶一定要纯，封闭结束之后要洗，常常是等到要封闭的时候发现没有牛奶，然后匆匆忙忙用PBST/TBST配置，配的匆忙的时候往往不管是否已经完全溶解。

印迹膜上的黑点，有些是封闭液和抗体稀释液没有充分溶解，黏附到抹上导致的，

在下面蛋白印迹出现空心属于曝光强度高，ECL底物消耗过快导致的，

针对第一种，封闭液或抗体稀释液充分溶解

第二种现象 1 降低上样量，抗体的浓度

2 让ECL显影液预留一些在膜上去曝光

造成背景脏的原因有很多，比如一抗没洗干净，或者二抗没洗干净，还有就是封闭的时候不完全。

背景脏可能是没封闭好，一些黑点可能是活化膜的时候有什么脏东西掉在了上面。