表位肽ELISA全阳或者全阴性，求解决

最近合成了几个接近20个aa的表位肽，做了ELISA，人血清全阳性包括正常血清，兔血清全阴性，包括感染兔血清，不知道什么原因，不知各位有没有解决的方法，步骤如下：

（1）4℃包被过夜，PBST洗板，5次，每次两分钟

（2）5%脱脂牛奶(2.5g脱脂奶粉+50mLPBST),37℃封闭1h，按上述操作洗板

（3）加入脱脂奶粉稀释后的血清（一抗），37℃孵育1h，按上述操作洗板

（4）加入脱脂奶粉稀释后的二抗，37℃孵育1h，按上述操作洗板

（5)加TMB显色液，37℃10-15min,加入终止液