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wb条带形状很奇怪,呈梭形或船形,请问该怎样解决呢?

相关实验:蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)

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是李羔羔呀

这次跑出来的wb很奇怪,求教大家!

下图一是内参β-actin,上样量是20ug,最左侧泳道是空白组(未加刺激的细胞)。下图二是之前用细胞跑出来的结果,泳道从左到右上样量依次是10 15 35 50ug。

电泳和转膜条件都是一样的,电泳液和转膜液也都是新的。区别是一抗二抗是回收的,所以分别用了3次和2次。

我的问题是:

1. 为什么这次的形状这么奇怪,呈梭形?

2. 为什么这次已经上到了20ug,但是比之前的10 15ug的条带还细,处理组我还能接受,但是最左侧泳道是空白组,也是如此。

下面两张图是我的目标蛋白之一。图一是这次的,分组同上,最左侧是空白组,上样量是20ug。图二是之前的,分组同上,未加刺激的细胞蛋白,上样量是10 15 35 50ug。

这次的结果形状更不规则,有的是梭形,有的像覆船形?而且似乎有降解,下方还有隐约的条带。

请问大家认为可能是什么原因呢?是这一批蛋白制备有问题吗?

请大家不吝赐教!非常感谢!

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4 个回答

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申东熙老伯

有帮助

梭形或船形可能是配胶没配均匀,也可能是样品盐浓度过高,电泳的时候可以先用10-15min用20V低电压跑十几分钟让盐分离。

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此用户已注销

有帮助

凝胶和玻璃挡板底部有气泡;两遍聚合不完全。其解决方法:电泳槽中加电泳液时排空玻璃挡板下方的气泡;配胶时充分混匀

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毛利小五郎的徒弟

有帮助

可能是蛋白质存在部分降解,出现了这种条带

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balalaLy

有帮助

大概率是因为回收的抗体有降解吧。

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