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求助 | 光敏蛋白不表达

相关实验:蛋白定量技术

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monoone

买的枢密的光敏蛋白,分别买了cre+dio和神经元特异性启动子两种,表达ChR2,分别在中缝核、蓝斑核和黑质致密部注射。注射速度50nl/min,停针10min。

注射后4周处死,切片观察荧光,结果只有黑质致密部的cre+dio有正常的表达,但也比较少。黑质致密部的特异性启动子表达比较弥散,哪哪都是纤维丝状的荧光,没有细胞膜上的表达。其他的位置都没有表达,能看到注射的针道,针道附近有一些散在的点状的荧光,针孔位置在目标核团的上方大概100um处。

不明白为啥不表达哇,坐标是之前打墨水验证过的,组里两个人分别做的,都没表达,枢密的技术就说是打歪了……

求助大家有没有遇到这种情况,是咋解决的哇?

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4 个回答

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今天加点happy

有帮助

你好,请问你切片后怎么保存呢?脑片风干了吗?还是切完直接放放冰箱?4度还是负20呢?封片了吗?

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阴凉处干燥2小时,-20度保存,防淬灭封片剂封片

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毛利小五郎的徒弟

有帮助

其实也有打歪的可能,如果你荧光总量够是可以考虑打歪的因素的,因为你提到有部分荧光,可能你通路最终点打在观察点之外,所以没有显像

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注射剂量:特异性启动子病毒是500nl,cre+dio是1:1混合,总共1 ul

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灵枢天问

有帮助

如果是打歪了那你看孔道就能看出来,有荧光还是说明打对了有可能是量的问题

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注射剂量:特异性启动子病毒是500nl,cre+dio是1:1混合,总共1 ul

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汤姆卜丽波

有帮助

你的注射量是多少呢,如果孔道痕迹还在并且方向没有错,那估计是注射剂量的问题

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注射剂量:特异性启动子病毒是500nl,cre+dio是1:1混合,总共1 ul

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