蛋白定量技术

实验分类：

蛋白质实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

蛋白质的定量分析是生物化学和其他生命学科员常涉及的分析内容。在生化实验中，对样品中的蛋白质进行准确可靠的定量分析，是经常进行的一项非常重要的工作。

原理

蛋白质中的肽键有双缩脲反应，在碱性溶液中与二价铜离子形成蓝紫色的络合物，在一定的范围内，颜色的深浅与蛋白质的含量成正比。

应用

蛋白测定

来源：丁香实验

操作方法

紫外光谱吸收法

标准曲线的制备⑴ 用精密天平称取牛血清白蛋白50mg，溶于50ml生理盐水中。⑵ 以生理盐水再稀释成每ml含0.1mg、0.2mg、0.3mg、0.4mg……0.9mg，以盐水对照。⑶ 测各管OD280 值。⑷ 以OD280 值为纵坐标，蛋白含量为横坐标，绘制标准曲线。

通过比对数据库相似序列确定功能

首先进行BLAST检索，如果不能提供相关结果，运行FASTA；如果FASTA也不能得到有关蛋白质功能的线索，最后可选用完全根据Smith-Waterman算法设计的搜索程序，预测蛋白质功能整理所有肯定的结果并核对一致性查对BLOCKS和PRINTS数据库查对PROSITE数据库未知序列是否包含保守序列模序是否未知蛋白质序列与已知功能的蛋白质相似确定跨膜螺旋、卷曲螺旋和前导序列

序列特性

进行数据库的相似性搜索

通过比对模序数据库等确定功能

蛋白质不同区段的进化速率不同：蛋白质的一些部分必须保持一定的残基模式以保持蛋白质的功能，通过确定这些保守区域，有可能为蛋白质功能提供线索。